梅斯納小體(Meissner corpuscle, 也稱為觸覺小體)是密集分布在哺乳動(dòng)物無毛皮膚上的機(jī)械感覺末梢器官。梅斯納小體的基本解剖結(jié)構(gòu)和支配它的Aβ(較大的胞體直徑和快速動(dòng)作電位傳導(dǎo))機(jī)械感覺神經(jīng)元已被廣泛描述。然而,人們對(duì)梅斯納小體以及支配它的Aβ機(jī)械感覺神經(jīng)元在觸覺相關(guān)行為、感覺運(yùn)動(dòng)能力和觸覺感知方面的要求卻知之甚少。
缺乏腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)或其受體TrkB的小鼠具有一系列發(fā)育障礙,包括缺乏梅斯納小體。來自美國(guó)哈佛醫(yī)學(xué)院和斯坦福大學(xué)的研究人員推斷,將TrkB操縱限制在感覺神經(jīng)元與選擇性遺傳標(biāo)記方法相結(jié)合,將允許他們研究梅斯納小體的發(fā)育組裝及其在軀體感覺中的功能。在研究梅斯納小體發(fā)育時(shí),他們發(fā)現(xiàn)有兩種類型的Aβ機(jī)械感覺神經(jīng)元支配梅斯納小體。他們?cè)u(píng)估了梅斯納小體對(duì)觸覺敏感度和精細(xì)感覺運(yùn)動(dòng)控制的要求,以及支配該機(jī)械感覺末端器官的兩種Aβ機(jī)械感覺神經(jīng)元的解剖學(xué)、生理學(xué)和超微結(jié)構(gòu)特性。相關(guān)研究結(jié)果發(fā)表在2020年6月19日的Science期刊上,論文標(biāo)題為“Meissner corpuscles and their spatially intermingled afferents underlie gentle touch perception”。
感覺神經(jīng)元特異性敲除TrkB導(dǎo)致梅斯納小體*喪失,而不影響小鼠無毛皮膚的其他機(jī)械感覺末端器官,包括Aβ機(jī)械感覺神經(jīng)元-梅克爾細(xì)胞復(fù)合物和帕西尼小體(Paciniancorpuscle,也稱為環(huán)層小體)。行為測(cè)量表明,缺乏梅斯納小體的小鼠在感知、對(duì)作用于無毛皮膚的輕微的可檢測(cè)力作出的反應(yīng)和精細(xì)的感覺運(yùn)動(dòng)控制方面存在缺陷。
遺傳標(biāo)記實(shí)驗(yàn)顯示,梅斯納小體由兩種類型分子上不同的Aβ感覺神經(jīng)元支配:一種表達(dá)TrkB,另一種表達(dá)酪氨酸激酶Ret。盡管支配著同一個(gè)末端器官,但是這兩種Aβ神經(jīng)元類型對(duì)觸覺刺激的反應(yīng)是不同的:TrkB陽性(TrkB+)的梅斯納小體傳入更敏感,在無毛皮膚的梯形壓痕的起始和偏移時(shí)都作出反應(yīng),而Ret+梅斯納小體傳入則不太敏感,很少在梯形壓痕偏移時(shí)作出反應(yīng)。一些Ret+神經(jīng)元甚至在靜態(tài)壓痕刺激時(shí)有持續(xù)反應(yīng)。此外,這兩種Aβ機(jī)械感覺神經(jīng)元類型的軸突末端被發(fā)現(xiàn)是同型平鋪,但異型偏移。計(jì)算建模表明,這種解剖學(xué)安排大限度地提高了編碼敏銳度的可用信息,同時(shí)確保使用有限數(shù)量的神經(jīng)元*覆蓋皮膚。后,使用電子顯微鏡的超微結(jié)構(gòu)分析顯示,更敏感的TrkB+梅斯納小體傳入的軸突末梢比不太敏感的Ret+梅斯納小體傳入的軸突末梢具有更多數(shù)量的片狀細(xì)胞包裹。
這些研究人員作出的結(jié)論是,兩種同型平鋪但異型偏移的Aβ機(jī)械感覺神經(jīng)元具有不同的分子、生理和超微結(jié)構(gòu)特性,都支配著梅斯納小體,而梅斯納小體是感知作用于無毛皮膚的輕微的可檢測(cè)力并作出行為反應(yīng)的基礎(chǔ)。
在細(xì)胞培養(yǎng)中,胎牛血清加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基的濃度大多為5%~20%(常見為10%)的。具體到不同試驗(yàn),應(yīng)依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),或細(xì)胞類型或基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分來確定濃度。
胎牛血清應(yīng)在-20℃儲(chǔ)存,運(yùn)輸應(yīng)干冰冷鏈運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融,確保血清中因子活性不受影響,保證血清優(yōu)良品質(zhì)。
關(guān)于胎牛血清的融化方法:因?yàn)檠逶谌诨^程中,瓶子里冰塊的底部你會(huì)看見亮亮的蛋白絲在下沉,如同蜂蜜溶于水時(shí)的亮線,這就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔點(diǎn)高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高級(jí)冰淇淋和大棒冰的區(qū)別,你懂得?。┰囅?,如果采用4℃過夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大約需要10小時(shí)左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此時(shí)就很容易有一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。
采用三步法,只要2.5個(gè)小時(shí),溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時(shí)間,而且大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。