細胞培養(yǎng)是研究細胞生物學(xué)的基礎(chǔ),胎牛血清作為重要的細胞培養(yǎng)試劑,在細胞培養(yǎng)過程中發(fā)揮著重要作用。Ausbian進口特級胎牛血清,內(nèi)毒素含量低,適合各類細胞生長繁殖。
綠色熒光蛋白(GFP)是一種常用的用于觀察細胞內(nèi)部的具體活動蛋白,將GFP序列搭載在能結(jié)合目標分子的基因序列后,就能形成用于指示目標存在狀態(tài)的報告基因。在細胞內(nèi)部中,報告基因與目的基因相連后,就能通過綠色熒光來顯示目標產(chǎn)物的信號。
近日,科研人員開發(fā)了一種多路復(fù)用策略,該策略使用自組裝肽在活細胞中隨機但穩(wěn)定的點聚集現(xiàn)有的遺傳編碼動態(tài)熒光報告,這種空間復(fù)用成像(SMI)策略可以測量存在于每個集群位置的蜂窩信號,具有比頻譜復(fù)用更大的復(fù)用容量。
然而,考慮到其報告身份編碼的空間性質(zhì),SMI不能用于可視化活細胞或細胞器中蛋白質(zhì)的組織,也不能可視化響應(yīng)刺激的蛋白質(zhì)運動。SMI也不能容易地測量由存在的蛋白質(zhì)量所指示的變化,如細胞基因表達或局部蛋白質(zhì)翻譯。然而,利用空間作為一種資源來促進smi成像——這是其他成像發(fā)展(如擴展顯微鏡)中使用的主題——提出了一個問題,即是否可以利用其他非常規(guī)資源(如時間)來增加活細胞中同時可觀察到的信號數(shù)量。
科研人員在此次研究中,通過使用具有不同時鐘特性的熒光團,來指示不同的細胞信號,一個簡短的視頻(在幾秒鐘的時間內(nèi)拍攝)記錄了每個像素處熒光的時間信息,可以使用標準解混線性代數(shù)進行反轉(zhuǎn),以產(chǎn)生該像素處的單個信號幅度。每個像素處的信號幅度僅僅是系數(shù)乘以每個熒光團的標準時間波動跡,當以加權(quán)形式求和時,就構(gòu)成了在該像素處獲得的記錄跡。
科研人員在這里使用具有不同關(guān)閉速率的可逆光開關(guān)FPs (rrsfp)來實現(xiàn)時鐘效果,盡管原則上任何時間波動的信號都可能適用于這一概念。研究表明,暫時復(fù)用成像(TMI)可以支持更多的信號一次成像比傳統(tǒng)的光譜復(fù)用可行的傳統(tǒng)顯微鏡上使用遺傳編碼試劑,揭示細胞周期蛋白之間的關(guān)系,以及不同的激酶活性之間的關(guān)系。TMI不需要任何硬件,除了標準的熒光顯微鏡,通常提供給生物學(xué)家,并使用遺傳編碼熒光報告,適合標準的生物學(xué)工作流程。