對于費力擴(kuò)增的細(xì)胞(如已轉(zhuǎn)染,或經(jīng)過體外刺激),如果細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染,但此細(xì)胞又不愿丟棄,希望繼續(xù)培養(yǎng),推薦使用MB公司生產(chǎn)的復(fù)合抗生素Zell Shield®。
注意:
①每次使用Zell Shield®之前,務(wù)必先用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理細(xì)胞,這樣才能達(dá)到最佳的支原體祛除效果。
②在祛除細(xì)胞支原體污染的過程中,需要環(huán)境、試劑及耗材確保潔凈,無新的支原體污染加入。
只要如法操作,在使用Zell Shield®四代后,細(xì)胞中的支原體即可祛除。
特點
(1)高效廣譜。Zell Shield®通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成,有效抑制上述微生物的增殖。
(2)安全。無細(xì)胞毒性,采用復(fù)合支原體敏感抗生素,對大多數(shù)細(xì)胞株無毒。
(3)活性穩(wěn)定。在細(xì)胞培養(yǎng)期間,Zell Shield®始終保持穩(wěn)定的活性。
(4)使用方便。Zell Shield®為無菌溶液,可直接加入培養(yǎng)基使用。
用法
(1)在每次使用Zell Shield®之前,細(xì)胞傳代時,先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法”處理好細(xì)胞,再使用加了Zell Shield®的培養(yǎng)基養(yǎng)細(xì)胞,能達(dá)到*佳的祛除支原體的效果。(“懸浮沖洗法”的詳細(xì)步驟,見下一頁)
(2)Zell Shield®常規(guī)為-18℃保存,建議使用前,先融化分裝,仍舊-18℃避光保存,使用時按需融化配置。避免反復(fù)凍融。
(3)Zell Shield®按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基。例如:500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®,50mL/瓶的Zell Shield®可供5L培養(yǎng)基使用。
廠家推薦的“懸浮沖洗法”(重要!)
(1)據(jù)研究表明,約98%的支原體存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞間隙。細(xì)胞傳代時,用干凈的PBS反復(fù)懸浮沖洗,就能把70%以上的支原體沖下來。
(2)支原體直徑在180~350nm之間,遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于細(xì)胞直徑。通過低速離心,很容易將細(xì)胞和支原體分離,棄上清即可祛除大部分支原體。
儲存條件
-18℃,避光保存。
與培養(yǎng)基混合后2-8℃儲存,不超過4個星期。